外泌体（Exosome）是细胞分泌的小型囊泡，直径通常在30-150纳米之间，具备双层膜结构，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳以及细胞培养基等生物体液中。这些微小颗粒承载了多种重要的生物信息，如蛋白质、脂类、DNA和RNA，广泛应用于细胞之间的通讯，以及在疾病的诊断和治疗中占有重要地位。鉴于外泌体在生物医学领域的突出潜力，其提取方法已成为科研的热点。

一、提取原理

外泌体的提取主要依赖于它们的物理和化学特性，包括大小、密度及表面标记物等。常用的提取技术有差速离心、密度梯度离心、磁珠法、超滤法、聚合物沉淀法和分子排阻法等。这些方法利用不同的物理或化学手段，从复杂的生物样本中有效分离外泌体。

二、实验步骤

1、预处理：对于细胞培养上清，首先应进行低速离心（如300g，4℃离心10分钟）以去除死细胞和细胞碎片。而对于血浆或尿液等生物体液，则可能需要更为复杂的预处理步骤，例如去除血小板和红细胞。

2、差速离心：①第一次离心：将预处理后的样本进行初次离心，通常使用较低的离心力（2000g，4℃离心20分钟），以进一步清除较大的颗粒与杂质。小心收集上清液，避免吸入沉淀物。②高速离心：将上清液转移至超速离心管中，进行高速离心（100,000g，4℃离心70分钟以上），使外泌体沉淀至管底。

3、洗涤与重悬：离心后小心去除上清液，保留沉淀物。使用预冷的PBS缓冲液轻轻洗涤沉淀物，以去除残余杂质。然后，用适量的PBS缓冲液将洗涤后的沉淀物重悬，得到外泌体悬液。

4、保存与检测：将提取的外泌体悬液分装至无菌的EP管中，置于-80℃冷冻保存。同时，可进行一系列检测以验证外泌体的纯度与质量，方法包括纳米颗粒跟踪分析（NTA）、透射电子显微镜（TEM）观察，以及Western Blot检测外泌体标志蛋白等。

三、注意事项

1、操作温度：所有操作应尽量在4℃条件下进行，以防止外泌体内成分的降解与变性。

2、保护膜结构：在操作过程中，尽量降低对外泌体的压力和剪切力，以维护其膜结构的完整性。

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