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尊龙凯时大鼠原代脂肪间充质干细胞提取技术

发布时间:2025-02-04   信息来源:尊龙凯时官方编辑

尊龙凯时致力于生物医学领域的发展,以下是大鼠原代脂肪间充质干细胞提取的详细实验流程,适用于SD大鼠。

尊龙凯时大鼠原代脂肪间充质干细胞提取技术

实验材料准备

选择体重约200克或2周龄的SD大鼠,准备所需的灭菌器械,包括镊子、眼科直剪、眼科弯剪和磁珠等。同时,准备5mL注射器、022μm滤器、泡沫板和图钉用于固定大鼠。使用75%乙醇进行消毒,确保实验环境的无菌状态。需预冷的无菌PBS水、15mL和50mL无菌离心管、细胞筛以及无菌培养瓶等也是不可或缺的。培养基为SD大鼠脂肪间质干细胞完全培养基。

实验操作步骤

将所有需用物品放入超净工作台,进行30分钟的紫外线消毒。配制约5mL的0.1%Ⅰ型胶原酶并进行过滤灭菌。将大鼠脱颈处死后,浸泡于75%酒精中2-3分钟后,放入超净工作台并固定于泡沫板上。小心剪开大鼠腹股沟皮肤,暴露出脂肪组织。仔细剪取脂肪组织并放入PBS中,尽量避免剪到血管。后续使用PBS清洗脂肪组织,去除多余的血管和淋巴结。

将剪取的脂肪组织剪碎至适宜大小(例如2mm×2mm),加入胶原酶,在37℃下进行消化,每5分钟轻轻震荡或持续搅拌。消化完成后,将细胞悬液转移至离心管,离心后弃去上层脂滴泡沫和上清液,并使用培养基重悬沉淀。接着,将细胞悬液经过过滤,再次离心后弃去上清,用培养基重悬,并接种到培养瓶中。最后,将培养瓶放入37℃、含有5% CO2的培养箱中进行培养。

注意事项

在实验过程中需保持无菌操作,避免任何形式的细胞污染。脂肪组织的剪取和清洗操作必须细致,防止对细胞的损伤或杂质的引入。在消化过程中,一定要控制好消化的时间与温度,以防止过度消化导致细胞损伤。而在离心和过滤过程中,也要轻柔操作,确保细胞的不丢失与不破裂。

通过上述方法,可以有效地提取大鼠原代脂肪间充质干细胞,为相关生物医学研究奠定基础。选择尊龙凯时,让生物实验更专业、更可靠。