收到尊龙凯时提供的3T6-Swissalbino小鼠胚胎成纤维细胞后,处理步骤如下:
1. 核查细胞状态
在接收到细胞后,首先检查细胞瓶是否完好,确保没有缝隙或裂痕。
2. 显微镜观察
使用显微镜观察细胞的生长情况,确认是否有细胞漂浮现象。
3. 消毒处理
使用新洁尔灭对细胞瓶的瓶口及瓶身进行消毒,以确保无菌环境。
4. 打开瓶口
开启瓶口后再次用新洁尔灭进行消毒,注意避免接触溢出的液体,并使用酒精灯对瓶口进行消毒。
5. 培养液转移
将培养液小心地转移至50ml离心管或广口瓶。如果细胞漂浮较严重,则进行离心处理,设定1000g,时间5分钟。将离心后的培养基转移至另一个大离心管中,留下少量以便吹打细胞沉淀形成悬液,最后回收细胞至原培养瓶中。如果漂浮不严重,也应进行一次离心。
6. 补充培养基
在原培养瓶中保留一部分原装培养液,然后补充新配制的培养基至合适容积(如4ml),使细胞适应新环境。当细胞生长至70-80%时,进行冻存,其中大部分细胞可进行冻存,小部分进行传代。
7. 再次观察细胞状态
在细胞适应新环境24-48小时后,再次使用显微镜观察细胞的生长状态。若细胞贴壁良好,形态饱满且无明显漂浮或死亡现象,则可以进入下一个步骤。
8. 细胞传代
在进行细胞传代时,轻轻晃动培养瓶以使贴壁细胞松动。随后,使用吸管轻轻吹打细胞,形成均匀的细胞悬液。根据1:3或1:4的比例,将细胞悬液分装至新的培养瓶中,并补充适量新鲜培养基。
9. 冻存细胞处理
对于需要进行冻存的细胞,选择合适的冻存液(通常含有血清、DMSO等)与细胞悬液按一定比例混合后装入冻存管。遵循慢冻原则,先将冻存管置于4℃冰箱中30分钟,然后移至-20℃冰箱2小时,最后放入-80℃冰箱或液氮中进行长期保存。
10. 定期更换培养基
在整个培养过程中,可定期更换培养基,以维持细胞的营养供应和生长环境。同时,务必注意无菌操作,防止细胞污染。通过这些详细的处理步骤,3T6-Swissalbino小鼠胚胎成纤维细胞在尊龙凯时的实验室中能够稳定生长,为后续的科学研究打下坚实的基础。