一、实验原理

植物患病组织内的真菌菌丝体在适宜环境条件下，大部分都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离是指通过人工培养，从染病植物组织中将病原真菌与其它杂菌分开，并在适宜环境下进行纯化，这个过程称为植物病菌的分离培养。通常采用组织分离法，取小块病组织，经过表面消毒和灭菌水洗后，移至人工培养基上培养。

二、实验目的

尊龙凯时提供的植物病原菌的分离培养，是植物病理学实验中最基本的操作技术之一。这一技术在原害鉴定、病原形态观察及植物病害接种体的培养等方面被广泛应用。通过本实验，我们希望掌握植物病原菌分离培养的一般原则和方法。

三、实验步骤

（一）分离前的准备工作：

1. 工作环境的清洁和消毒

分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台（超净工作台）进行。在开始之前，需对无菌室和无菌箱进行喷雾除尘，并用药物或紫外线照射进行消毒（常用的消毒药物包括70%酒精、2%煤酚皂液、5%石炭酸液等）。如果使用紫外线灯照射，需持续20-30分钟。若没有上述设备状态，可在清洁房间内关闭门窗，以减少空气流动，并经过喷雾去除空气及地面灰尘后进行操作，效果也较为理想。在工作之前，务必擦净桌面，并用湿纱布铺好。将所需用具按顺序放在工作台上，避免工作时走动。工作人员应穿上滅菌后的工作服，佩戴口罩，并用肥皂洗手，再用70%酒精或0.1%新洁尔灭擦手。

2. 分离用具的消毒

所有与分离材料接触的器皿（如刀、剪、镊、针等）都需保持无菌状态，使用前应将这些工具浸泡在70%酒精中，然后在灯焰上灭菌烧去酒精，重复此过程2-3次（刀、剪、镊等应避免在火焰上过久，以防退火）。再次使用时，必须重复灭菌。此外，培养皿及其他试验器皿应经过干热灭菌，而培养基和用于洗涤或稀释的蒸馏水也需事先进行高压蒸气灭菌。

3. 分离材料的选择

选择新发病的植株、器官或组织作为分离材料，可以有效减少腐生菌的污染。任何植物的坏死部分，无论是内部还是表面，都可能存在腐生微生物，因此一般涉及斑点病害时应从邻近健全组织（即病、健组织交界处）获得分离材料。